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pcr聚合酶鏈式反應

pcr聚合酶鏈式反應步驟

pcr聚合酶鏈式反應的原理和操作

pcr聚合酶鏈式反應有哪些

pcr聚合酶鏈式反應名詞解釋

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pcr聚合酶鏈式反應步驟

pcr聚合酶鏈式反應不是一步到位的，那么pcr聚合酶鏈式反應步驟是什么呢？

實驗器具與材料：移液槍：200ul、10ul；吸頭：200ul、20ul；吸頭臺：放置200ul和20ul的吸頭一個；EP管1.5ml、100ul；塑料制品：（包括吸頭、EP管等）送至高壓3次，試驗前將槍頭放入吸頭臺。雙蒸水100ml鹽水瓶內裝40ml蒸餾水，送至高壓，后分裝到幾個1。5mlEP管中，-20℃中保存備用。

然后準備100ul EP管，依次在管中加入50ul反應體系），稍離心,100℃沸水浴1分鐘,趁熱加入Tag酶0.5ul（冰上操作）,再加入50ul液體石蠟封閉,10000rmp離心1分鐘,進行40個循環，然后72℃10min 完后4℃保溫。10000rmp離心5min，將下層水相轉入新的0.65mlEP管中，－20℃保存。

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pcr聚合酶鏈式反應的原理和操作

聚合酶鏈式反應有pcr的方面，那么pcr聚合酶鏈式反應的原理和操作是什么呢？

pcr聚合酶鏈式反應的原理和操作：將聚合酶鏈式反應反應體系升溫至95℃左右，雙鏈的DNA模板就解開成兩條單鏈，此過程為變性。然后將溫度降至引物的Km值以下，3端與5端的引物各自與兩條單鏈DNA模板的互補區域結合，此過程稱為退火。當將反應體系的溫度升至70℃左右時，耐熱的Taq DNA聚合酶催化四種脫氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互補方式依次加至引物的3端，形成新生的DNA鏈。

每一次循環使反應體系中的DNA分子數增加約一倍。理論上循環幾次，就增加為2^n倍。當經30次循環后，DNA產量達2^30拷貝，約為10^9個拷貝。由于實際上擴增效率達不到2倍，因而應為(1+R)^n，R為擴增效率。

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pcr聚合酶鏈式反應有哪些

某些領域需要pcr聚合酶鏈式反應的，那么pcr聚合酶鏈式反應有哪些呢？

pcr聚合酶鏈式反應有模板核酸。用于聚合酶鏈式反應的模板核酸可以是DNA，也可以是RNA。當用RNA作模板時，首先要進行反轉錄生成cDNA，然后再進行正常的聚合酶鏈式反應循環。核酸模板來源廣泛，可以從培養細胞、細菌、病毒、組織、病理標本、考古標本等中提取。

pcr聚合酶鏈式反應還有引物。引物決定聚合酶鏈式反應擴增產物的特異性與長度。因此，引物設計決定聚合酶鏈式反應的成敗。

pcr聚合酶鏈式反應還有耐熱的TaqDNA聚合酶。1976年Chien分離出熱穩定聚合酶，1986年Erlich分離并純化了適于聚合酶鏈式反應的Tq熱穩定性聚合酶，為聚合酶鏈式反應成為實用技術奠定了基礎，現已用基因重組生產。

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pcr聚合酶鏈式反應名詞解釋

pcr聚合酶鏈式反應看情況用的，對于pcr聚合酶鏈式反應名詞解釋是什么呢？

pcr聚合酶鏈式反應又稱體外基因放大技術，是用DNA聚合酶在體外系統中誘發一對引物間的DNA雙鏈的合成過程。經過20～30次循環后，可使目的基因片段成百萬倍地擴增，使得對該基因片段的分析研究更為便利。PCR技術自1985年創立以來，經過不斷改進，目前已成為分子生物學研究的重要手段。PCR技術已經應用于遺傳病的基因診斷和產前診斷，病原體的鑒定，癌基因的分析研究等。最突出的是經PCR放大后的DNA片段可以直接進行順序分析。

本身DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。

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