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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理和過程

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理及其應(yīng)用

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理和特點(diǎn)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理及功能

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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理和過程

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理和過程不會很復(fù)雜，那么聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理和過程什么樣呢？

PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合。

而DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需 2～4分鐘，2～3小時就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。到達(dá)平臺期所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理及其應(yīng)用

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)最終還是用于生活，那么聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理及其應(yīng)用有哪些呢？

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)廣泛地用于分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)不僅可以用于基因的分離、克隆和核苷酸序列分析，還可以用于突變體和重組體的構(gòu)建，基因表達(dá)調(diào)控的研究，基因多態(tài)性的分析，遺傳病和傳染病的診斷，腫瘤機(jī)制的探索，法醫(yī)鑒定等諸多方面。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理為DNA的復(fù)制。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種簡單，專一，靈敏，快速的擴(kuò)增特定DNA的方法，但標(biāo)準(zhǔn)PCR方法的功能局限于定性擴(kuò)增，其原因在于PCR的前階段產(chǎn)物按指數(shù)方式擴(kuò)增，產(chǎn)物增長呈直線，在此階段目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物的累積量還相當(dāng)?shù)停胁荒苡脽晒馊旧珓⑷玟逡义V對電泳后的條帶作準(zhǔn)確的定量測定。

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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理和特點(diǎn)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)有時會出現(xiàn)假陰性，對于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理和特點(diǎn)有哪些呢？

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理和特點(diǎn)是體外快速DNA復(fù)制，還有就是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)有五要素，即參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物(PCR引物為DNA片段，細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈)、酶、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+)。

當(dāng)特定mRNA由于含有使反轉(zhuǎn)錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時，可采用隨機(jī)六聚體引物這一不特異的引物來拷貝全長mRNA。用此種方法時，體系中所有RNA分子全部充當(dāng)了cDNA第一鏈模板，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)引物在擴(kuò)增過程中賦予所需要的特異性。通常用此引物合成的cDNA中96%來源于rRNA。

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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理及功能

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)基于DNA研發(fā)的，那么聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理及功能是什么呢？

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理就是DNA的半復(fù)制情況，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理中用Taq酶進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增，一般只能擴(kuò)增小于400bp的DNA片段，經(jīng)過對酶的結(jié)構(gòu)與功能的改造，以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法學(xué)的改進(jìn)，現(xiàn)已能擴(kuò)增20kb以上的DNA分子。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)目前廣泛地用于分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域。

本身DNA在細(xì)胞中的復(fù)制是―個比較復(fù)雜的過程。參與復(fù)制的基本因素有：DNA聚合酶、DNA連接酶、DNA模板、由引發(fā)酶合成的RNA引物、核苷酸原料、無機(jī)離子、合適的pH、以及解開DNA的超螺旋及雙螺旋等結(jié)構(gòu)的若干酶與蛋白質(zhì)因子等。

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