97在线观看视频,亚洲网址在线观看,国产综合视频在线观看

rna聚合酶鏈式反應

rna聚合酶鏈式反應是什么

rna聚合酶鏈式反應技術

rna聚合酶鏈式反應的原理

rna聚合酶鏈式反應操作過程

最專業的親子百科

rna聚合酶鏈式反應是什么

rna聚合酶鏈式反應主要檢查的是RNA，那么rna聚合酶鏈式反應是什么來的呢？

RNA的聚合酶鏈式反應：目前常用的RNA檢測方法有原位雜交，點雜交，Northern印記雜交以及核酸酶保護試驗等。這些方法的普遍缺點是難以檢測低豐度的信使RNA，并且操作繁瑣，將RNA反轉錄和PCR結合起來建立RNA聚合酶鏈式反應（RT-PCR）則可以克服上述缺點。

其實人體一個細胞含RNA約10pg（含DNA約7pg）。與DNA相比，RNA種類繁多，分子量較小，含量變化大。RNA可根據結構和功能的不同分為信使RNA和非編碼RNA。非編碼RNA分為非編碼大RNA和非編碼小RNA。非編碼大RNA包括核糖體RNA、長鏈非編碼RNA。非編碼小RNA包括轉移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA（20~300nt）包括 miRNA、 SiRNA、 piRNA、scRNA、 snRNA、 snoRNA等，細菌也有小分子RNA（50~500nt）。

查看詳情

rna聚合酶鏈式反應技術

RNA方面有rna聚合酶鏈式反應技術，那么rna聚合酶鏈式反應技術什么樣呢？

rna聚合酶鏈式反應技術先在反轉錄酶的作用下以信使RNA為模板合成cDNA，再以CDNA為模板進行PCR反應。此法快速，簡便，并且靈敏度高。rna聚合酶鏈式反應技術可以檢測單個細胞中少于10個拷貝的特異RNA。

任何生物大分子都有結構的多樣性和特異性。RNA的結構特異性主要體現在組成RNA的單體——核糖核苷酸的數目和排列順序上。比如某段RNA含有100個核糖核苷酸，它的多樣性可以達到4的100次方；但每一種RNA只有一種結構，這就是它的特異性。就像班里有50個學生，排位時第一個學生有50中選擇，第二個學生有49個選擇，以此類推，班里排位的方式可以多達50的階乘，這就是多樣性；但現實中班里的位次就是眼前這一種，這就體現了特異性。

查看詳情

rna聚合酶鏈式反應的原理

RNA跟DNA的機制是不太一樣的，其中rna聚合酶鏈式反應的原理是什么呢？

rna聚合酶鏈式反應的關鍵步驟是RNA的反轉錄，要求RNA模板必須是完整。并且不含DNA，蛋白質等雜質。若RNA模板中污染了微量DNA，擴增后會出現特異DNA的PCR產物。而cDNA擴增產物卻很少，必要時可用無ＲＮａｓｅ的ＤＮａｓｅ處理反轉錄產物，消除ＤＮＡ后在進行ＰＣＲ。如果蛋白質未除盡可與ＲＮＡ結合，從而影響反轉錄和ＰＣＲ反應。

目前轉移RNA（tRNA）在蛋白質合成過程中負責轉運氨基酸、解讀mRNA遺傳密碼。tRNA占細胞總RNA的10%~15%，絕大多數位于細胞質中。tRNA由Crick于1955年提出其存在，Zamecnik和 Hoagland于1957年鑒定。

查看詳情

rna聚合酶鏈式反應操作過程

rna聚合酶鏈式反應操作得當才準確，那么rna聚合酶鏈式反應操作過程是什么呢？

rna聚合酶鏈式反應定量方法包括PCR反應和轉錄反應二個步驟，二個步驟相互接續，可以只用一個試管來完成，先用PCR來擴增目標基因，但PCR循環數比通常少5-10個循環，雖然此時反應液中擴增產物的總量較少，不能直接用通常的核酸染色劑來定量測定，但因為PCR反應仍處在直線階段未進入平坡期，所以擴增產物總量與樣品中原始模板的數量成正比例。其在于用轉錄反應使PCR擴增產物進一步按線性增加的方式合成RNA。這一設想能付之實現的基礎是發現PCR反應液的必要成份脫氧核糖核苷酸，正，反引物和DNA聚合酶等在相當寬的濃度范圍內對轉錄反應沒有可測見的顯著影響。

所以，在完成PCR反應后可以不經過任何分離步驟而進入轉錄反應。在RNA聚合酶和核糖核苷酸底物過量，反應溫度和時間固定的條件下，RNA的合成量與轉錄反應的模板數量，即PCR擴增產物的數量成正比例，所以，最終合成的RNA量反映了樣品中原始模板DNA的數量。由轉錄反應合成的RNA量可達到模板數量的幾百至千倍，從而可以方便地用溴乙錠或其他核酸染色劑定量測定。

查看詳情